通過光合作用固定的二氧化碳與太陽能在生物體內有三種最主要的存儲形式：多糖、油脂和蛋白質，它們共同構成了生物碳存儲與生物能源產業的物質基礎。但是目前對細胞中這三類高含能儲碳分子的識別、表征和定量極為繁瑣，而且通常難以在單個細胞精度測量,這一瓶頸限制了光合固碳細胞工廠的篩選與改造效率。青島能源所單細胞中心發明了基于“拉曼組”的單細胞快檢技術，能夠在單個細胞精度同時測量淀粉、甘油三酯、蛋白質含量以及油脂不飽和度,為細胞工廠的性能測試平臺增添了一個嶄新手段。該工作于11月19日在線發表于Biotechnology for Biofuels。

　　目前測定細胞中淀粉、甘油三酯和蛋白質的含量通常需要三個并行流程，每個流程都包括細胞培養以積累足夠生物質、從生物質中提取并分離目標化合物、用特定方法定量目標組分等繁雜的步驟。這些傳統方法遵循著“一個流程檢測一種生物大分子”的模式，既耗時又耗力，而且難以分析生長緩慢或尚未培養的細胞。因此，發展一種快速、低成本、高通量、同時測定單個細胞中多種儲碳分子的方法具有重要價值。

　　“拉曼組”（Ramanome）是特定狀態下，一個細胞群體之單細胞拉曼光譜的集合。單細胞中心何曰輝等以萊茵衣藻、微擬球藻等為模式，基于拉曼組技術，建立了同時定量單個細胞中淀粉、蛋白質、甘油三酯含量和脂質不飽和度的方法（圖1）。同時，由于拉曼組可直接跳過微藻細胞培養擴增，而且在不破壞細胞的前提下于秒級別完成測量，因此篩選速度提高了至少兩個數量級。在此基礎上，研究人員提出了累積多樣性指數、累積含量和累積異質性、最小取樣深度和最安全取樣深度等新概念，建立了拉曼組取樣深度與表型測量精度的關聯，從而從理論上指導了拉曼組測量參數的選擇與優化。該研究進一步提出，13個特定拉曼峰組合而成的“細胞儲碳譜拉曼識別碼”可靈敏、可靠、高通量地表征單個細胞中的淀粉、蛋白質、甘油三酯含量和油脂不飽和度等關鍵表型，并區分與揭示細胞中儲碳組分及其相互轉化的靜態與動態特性。此外，在液體懸浮培養的活細胞、-80 冷凍保存的濕藻泥和冷凍干燥藻粉等不同細胞保藏狀態下，測量結果之間高度一致，因此拉曼組技術具有應用上的普適性。

　　合成生物學領域的跨越式進展，在相當程度上取決于“基因型設計”、“基因型合成”、“細胞表型測試”這三大共性技術平臺的突破。其中，隨著基因組測序與合成在通量與成本上的大幅度改進，“細胞表型測試”這一共性環節已成為人工細胞構建與生物元件表征的“限速步驟”之一。單細胞中心提出的拉曼組技術能夠在單個細胞精度無需標記、非破壞性、快速地識別理論上近乎無限的細胞表型，而且結合前期發明的RADS（Wang, et al, Anal Chem, 2017）、RAMS（Zhang, et al, Anal Chem, 2015）等一系列單細胞流式拉曼分選技術，能夠實現單細胞功能識別、分選、測序與培養這一“細胞表型測試”完整流程的通量化、儀器化與自動化。因此，拉曼組有望成為一個具有普適性的新一代細胞功能測試儀器平臺與單細胞表型大數據類型，服務于能源、環境、健康、海洋、生物安全等諸多應用領域的合成生物學研究與產業。

圖1、 拉曼組技術同時測定單個微藻細胞中淀粉、蛋白質和甘油三酯含量　

原文鏈接：

1. He Yuehui, Zhang Peng, Huang Shi, Wang Tingting, Ji Yuetong, Xu Jian: Label-free, Simultaneous Quantification of Starch, Protein and Triacylglycerol in Single Microalgal Cells. Biotechnology for Biofuels 2017, 10:275.

https://biotechnologyforbiofuels.biomedcentral.com/articles/10.1186/s13068-017-0967-x

2. Wang Xixian, Ren Lihui, Su Yetian, Ji Yuetong, Liu Yaoping, Li Chunyu, Li Xunrong, Zhang Yi, Wang Wei, Hu Qiang, Han Danxiang, Xu Jian and Ma Bo,, Raman-activated Droplet Sorting (RADS) for Label-free High-throughput Screening of Microalgal Single-cells, Analytical Chemistry, 2017. DOI:10.1021/acs.analchem.7b03884.